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羥自由基清除能力測定試劑盒說明書 |
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羥自由基清除能力測定試劑盒說明書 可見分光光度法 注意：正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。 測定意義 羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂類等生物分子，造成細胞結構和功能受損，進而導致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標之一，在抗氧化類 保健品和藥品研究中得到廣泛應用。 測定原理 H2O2/ Fe2+通過Fenton 反應產(chǎn)生羥自由基，將鄰二氮菲- Fe2+水溶液中 Fe2+氧化為Fe3+，導致 536nm吸光度下降，樣品對536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了樣品清除羥自由基的能力。 自備實驗用品 可見分光光度計、恒溫水浴鍋、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。 試劑組成和配制 提取液：液體 50 mL×1 瓶，4℃保存。 試劑一：液體 8 mL×1 瓶，4℃避光保存。 試劑二：液體 20 mL×1 瓶，4℃保存。 試劑三：液體 5 mL×1 瓶，4℃保存。 試劑四：液體 5 mL×1 瓶，4℃保存。 樣品的制備 1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 2. 血清、果汁等液體樣品可直接測定。 3. 提取物（或者藥物）可配制成一定濃度，如 5 mg/mL。 操作步驟
注意：空白管和標準管只需測定一次。 計算公式 羥自由基清除率 D% =（OD測定管- OD對照管）÷（OD空白管-OD對照管）×100%
注意事項 為了比較不同樣品羥自由基清除能力，對于同一批樣品必須加入等量的樣品，血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。 |
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