業(yè)執(zhí)照.jpg)
SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶（RNase H-）說明書
SuperRT Reverse Transcriptase
目錄號(hào)：YJ0740
保存條件：-20℃保存。
組分說明
Cat. No. YJ0740 YJ0740A
Kit Size 25 100
SuperRT，200 U/μl 25 μl 100 μl
5×RT Buffer 120 μl 500 μl
本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶是一種利用大腸桿菌工程菌進(jìn)行重組與表達(dá)的全新逆轉(zhuǎn)錄
酶。與Moloney鼠白血病病毒來源的M-MLV和鳥成髓細(xì)胞病毒來源的 AMV不同，該酶
不具有RNase H活性，能夠轉(zhuǎn)錄多種 RNA模板，可利用極低量的總RNA或mRNA
合成cDNA*鏈，起始樣本量可低至pg級(jí)，zui大限度將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA*鏈。
SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶與RNA親合能力強(qiáng)，能通讀GC含量高，二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板，獲
得高產(chǎn)量的cDNA。該酶耐熱性及穩(wěn)定性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單快速，可以合成 100bp-12kb的
cDNA。適用于*鏈cDNA的合成、RT-PCR、RT-qPCR以及全長(zhǎng)cDNA文庫的構(gòu)建等。
活性定義
以Poly（A）為模板，oligo（dT）為引物，在 37℃條件下，10分鐘內(nèi)催化摻入 1
nmol的dTTP所需酶量定義為一個(gè)活性單位(U)。
質(zhì)量控制
200 U的本酶和1 μg的16 S，23 S rRNA在37℃下反應(yīng)1小時(shí)，RNA的電泳譜帶不
發(fā)生變化。
注意事項(xiàng)
1．在操作過程中應(yīng)避免RNase污染，防止RNA降解或?qū)嶒?yàn)中的交叉污染，建議在專門
的區(qū)域進(jìn)行RNA操作，使用專門的儀器和耗材，操作人員帶口罩和一次性手套并經(jīng)
常更換手套。
2．實(shí)驗(yàn)盡量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，應(yīng)使用0.1％DEPC（焦碳酸二乙
酯）水溶液在37℃處理12小時(shí)，并在120℃下高壓滅菌30分鐘后使用，或者將玻璃
器皿在180℃下干熱滅菌60分鐘后使用。實(shí)驗(yàn)中用到的無菌水應(yīng)使用 0.1%的DEPC
處理后進(jìn)行高壓滅菌。
3．本試劑盒中的所有試劑使用前請(qǐng)上下顛倒輕輕混勻，盡量避免起泡，并經(jīng)短暫離心
后使用。所涉及的酶類使用后應(yīng)盡快放回-20℃，避免反復(fù)凍融。
4．若起始RNA的量小于50 ng，建議加入RNA酶抑制劑（RNasin）。本試劑盒并未提
供，如需要可單獨(dú)向本公司訂購(gòu)，貨號(hào)：YJ0596。
使用方法
注意：1 ng-5 μg總RNA可建立20 μl反應(yīng)體系，如果總RNA量大于5 μg，請(qǐng)按比例擴(kuò)大反應(yīng)體系。i逆轉(zhuǎn)錄操作步驟：
1．將RNA模板、引物、dNTP Mix、RT Buffer、SuperRT和RNase-Free Water溶解并
置于冰上備用。
2．根據(jù)以下表格配制反應(yīng)體系，總體積為20 μl。
試劑 20 μl反應(yīng)體系 終濃度
dNTP Mix，2.5 mM Each 4 μl 500 μM Each
Oligo-dT Primer，100 μM
或 Random Primers，50 μM 1 μl
或 Specific Primer ,10 μM
RNA Template X μl 50 pg-5 μg
5×RT Buffer 4 μl 1×
SuperRT，200 U/μl 1 μl
RNase-Free Water up to 20 μl
注意：若起始RNA的量小于50 ng，則建議加入RNA酶抑制劑（RNasin）。本試劑盒并未提供，如需要可單獨(dú)向本公司訂購(gòu)，貨號(hào)：YJ0596。
3．渦旋震蕩混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
4．42℃孵育30-50分鐘，85℃孵育5分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，短暫離心，置于冰上冷卻。
5．逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于PCR反應(yīng)和熒光定量PCR反應(yīng)，或置于-20℃長(zhǎng)期保存。
ii 若逆轉(zhuǎn)錄效率低，或RNA模板二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜、GC含量高時(shí)，建議采用以下步驟：
1．將RNA模板、引物、dNTP Mix、RT Buffer、SuperRT和RNase-Free Water溶解并
置于冰上備用。
2．根據(jù)以下表格配制反應(yīng)體系，總體積為15 μl。
試劑 20 μl反應(yīng)體系 終濃度
dNTP Mix，2.5 mM Each 4 μl 500 μM Each
Oligo-dT Primer，100 μM
或 Random Primers，50 μM 1 μl
或 Specific Primer ,10 μM
RNA Template X μl 50 pg-5 μg
RNase-Free Water up to 15 μl
3．70℃孵育10分鐘，迅速冰浴2分鐘。
4．短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
5．繼續(xù)向以上反應(yīng)液中加入以下試劑：
試劑 20 μl反應(yīng)體系 終濃度
5×RT Buffer 4 μl 1×
注意：若起始RNA的量小于50 ng，則建議加入RNA酶抑制劑（RNasin）。本試劑盒并未提供，
如需要可單獨(dú)向本公司訂購(gòu)，貨號(hào)：YJ0596。
6．輕輕吹打混勻，若反轉(zhuǎn)錄引物為Oligo-dT Primer或Specific Primer時(shí)，42℃孵育2分
鐘；若反轉(zhuǎn)錄引物為Random Primers，則25℃孵育10分鐘。
7．加入1 μl SuperRT（200 U/μl），輕輕吸打混勻。42℃孵育50分鐘。
8．85℃孵育5分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，短暫離心，置于冰上冷卻。
9．逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于PCR反應(yīng)和熒光定量PCR反應(yīng)，或置于-20℃長(zhǎng)期保存。
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