業(yè)執(zhí)照.jpg)
WB實(shí)驗(yàn)注意細(xì)節(jié)
1. 細(xì)胞樣本，收細(xì)胞時(shí)， PBS預(yù)冷。
2. 組織樣本在取材時(shí)離體組織應(yīng)盡快凍存，可以置于液氮中迅速冷凍，使用組織勻漿機(jī)進(jìn)行勻漿時(shí)， 一次研磨時(shí)間不宜過長(zhǎng)， 40s左右即可，如研磨不充分，可再次研磨。
3. PMSF應(yīng)注意搖勻至無結(jié)晶時(shí)方可使用。
4. 冰上裂解時(shí)，可以晃動(dòng)以使裂解充分。
5. 裂解后的樣本盡量分裝保存，避免反復(fù)凍融，盡快變性使用。
6. BCA定量時(shí)盡量不使用96孔板最邊緣一圈（由于有些儀器邊緣效應(yīng)）。
7. 樣本可以根據(jù)具體情況稀釋合適的倍數(shù)再進(jìn)行定量，以免超出標(biāo)曲范圍。
8. BCA定量時(shí)，可以使用儀器中速輕微震蕩3-10秒，混勻96孔板內(nèi)液體，再進(jìn)行測(cè)量。
9. 變性時(shí)，注意加熱后小心管蓋爆開。
10. 配膠時(shí)，板子一定徹底清洗干凈。
11. 配膠的各組分注意充分混勻。
12. 點(diǎn)樣時(shí)，多余的孔可以用loading buffer補(bǔ)齊。
13. 轉(zhuǎn)膜時(shí)， 一定帶手套才可以觸碰濾紙和膜，以防污染。
14. 轉(zhuǎn)膜不可放反，牢記黑膠白膜，注意電極正負(fù)極。
15. 封閉時(shí)， BSA或牛奶一定充分溶解。
16. 抗體種屬要注意區(qū)分。
17. 洗膜要充分。
18. 顯影液應(yīng)滴加均勻。
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